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    单克隆抗体鉴定实验

    时间:2012/2/22 9:00:16|点击数:

        1.杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。   

    2.单克隆抗体的类型、亚型的测定:购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清,采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。

      ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书

      一、试剂原理:本试剂盒利用双抗体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克隆抗体或特异亲和纯化的单克隆抗体的类和亚类(可区分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA)。采用小鼠抗体共有位点的二抗包被微孔板,与加入的培养上清中的小鼠抗体结合,再加入HRP标记的抗小鼠各类、亚类的抗体来分别反应,最后用TMB底物系统显色并用稀硫酸终止,再通过酶标仪检测吸光度来判断被测单克隆抗体的类或亚类。本试剂盒具有极高的分辨率,是您鉴定小鼠单克隆抗体类、亚类的可靠工具。

      二、组成成分:

    酶标板 含自封袋1

    192

    标本稀释液

    30ml

    通用阳性对照 内含小鼠 IgG1\G2a\G2b\G3\M\A

    2ml

    显色剂A

    20ml

    酶标二抗 6

    6×4ml

    显色剂B

    20ml

    20×清洗液

    50mL

    反应终止液

    20ml

    封板膜

    4

    说明书和加样图

    1

    三、使用范围:用于小鼠单克隆抗体Ig类、亚类的鉴定以及相关内容的研究。

      四、使用方法:

      1首先将试剂盒恢复室温(大约30分),然后用纯水把清洗液配成工作浓度(一份浓缩清洗液加19份纯水)。

      2取出酶标板。每个标本需要6孔,阳性对照6孔。多余的用自封袋保存,记得放入干燥剂。

      3将细胞培养上清(或特异亲和纯化的抗体)50μl加入酶标微孔板,每个标本加6孔,阳性对照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl标本稀释液。贴上封板膜37温育30分钟。

      4弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性对照的6孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37温育30分钟。

      5吸弃板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂A和显色剂B50μl,换一张新的封板膜贴板避光37显色20分钟。

      6本试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果,看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。更可将反应终止液(每孔50μl)终止反应后用酶标仪450nm测定波长,630nm参考波长双波长测定结果,参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。阳性对照0D小于0.5实验无效,需要重做。

      五、产品特点:高灵敏度、高特异性、结果容易判定。当然您如果觉得很多试剂自己可以准备想省一笔费用,那您可以登陆网站选择我们为您准备的简装抗体鉴定产品C030215。当然您也可以下次把标本交给我们来做并且不会增加太多费用!!

      六、保存条件:2-8避光保存效期一年。不正确存放或过于频繁开启使用有可能因此使效期缩短。

      七、注意事项:

      1虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。

      2在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万,虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂,有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的C030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果。

      3手洗板子时一定要把孔加满,停留10秒然后弃尽,最后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出,要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。

      4一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好,随盒存放。

      5拿放板子时不要剧烈抖动,以免孔间交叉污染出现错误结果。

      6出现异常结果请随时咨询我们。

      7.单抗的特异性鉴定可以采用各种方法,如免疫荧光法、ELISA法、间接血凝和免疫印迹技术等,同时还需做免疫阻断试验等。

      8.单抗的效价测定可采用凝集反应、ELISA或放射免疫测定。不同的测定方法效价不同。培养上清液的效价远不如腹水的效价。采用凝集反应,腹水效价可达5×104。而采用ELISA检查,腹水效价可达1.0×106。单抗的效价以培养上清和腹水的稀释度表示。

      9.必要时还可以测定单抗的亲和力和识别抗原表位的能力测定。

    本文来源:网络     作者:admin